【專利類型】外觀設(shè)計【申請人】上海昆杰五金工具有限公司【申請人類型】企業(yè)【申請人地址】201108上海市閔行區(qū)華寧路3740弄198號【申請人地區(qū)】中國【申請人城市】上海市【申請人區(qū)縣】閔行區(qū)【申請?zhí)枴緾N200630046089.1【申請
【摘要】 一種MGB探針多重熒光定量PCR檢測大腸桿菌 O157的方法，構(gòu)建重組質(zhì)粒，設(shè)計合成引物和Taqman－MGB 探針，進行二重熒光定量PCR，將大腸桿菌O157的rfbE、vt2 的一段保守序列進行PCR擴增，獲得目的片斷，再將目的片 斷與PMD 18－T Vector連接，得到重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn) 化DH5a感受態(tài)大腸桿菌細胞，擴大培養(yǎng)，獲得高濃度的質(zhì)粒， 將此高濃度質(zhì)粒作10倍比稀釋，作為標準樣品，將標準樣品 和待測樣品共同作二重熒光定量PCR，標準樣品形成標準曲 線，根據(jù)標準曲線可計算出待檢樣品中大腸桿菌O157的含量。 本發(fā)明使用MGB探針，具有更高的敏感性和特異性，能快速、 準確地檢測樣本中的大腸桿菌O157含量，可同時檢測大腸桿 菌O157的兩個特異性毒力基因，是一種快速、準確的大腸桿 菌O157檢測方法。 【專利類型】發(fā)明申請 【申請人】上海交通大學 【申請人類型】學校 【申請人地址】200240上海市閔行區(qū)東川路800號 【申請人地區(qū)】中國 【申請人城市】上海市 【申請人區(qū)縣】閔行區(qū) 【申請?zhí)枴緾N200610028327.5 【申請日】2006-06-29 【申請年份】2006 【公開公告號】CN1952647A 【公開公告日】2007-04-25 【公開公告年份】2007 【授權(quán)公告號】CN100491977C 【授權(quán)公告日】2009-05-27 【授權(quán)公告年份】2009.0 【發(fā)明人】嚴亞賢; 朱向玲; 孫建和; 陸承平 【主權(quán)項內(nèi)容】1、一種MGB探針多重熒光定量PCR檢測大腸桿菌0157的方法，其特征 在于，設(shè)計合成rfbE、vt2引物和Taqman-MGB探針，分別用rfbE、vt2引 物進行PCR擴增，獲得兩個目的片斷，將目的片斷分別與PMD？18-T？Vector 連接，得到重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)大腸桿菌細胞，擴大培 養(yǎng)，提取高濃度的重組質(zhì)粒，將此高濃度質(zhì)粒作10倍比稀釋，作為標準樣 品，將標準樣品和待測樣品共同作二重熒光定量PCR，標準樣品形成標準曲 線，根據(jù)標準曲線計算出待檢樣品中大腸桿菌0157的含量。 【當前權(quán)利人】上海交通大學 【當前專利權(quán)人地址】上海市閔行區(qū)東川路800號 【統(tǒng)一社會信用代碼】1210000042500615X0 【被引證次數(shù)】3 【家族被引證次數(shù)】3
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