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【摘要】 該數(shù)據(jù)由<馬克數(shù)據(jù)網(wǎng)>整理 。一種鑒別診斷禽流感感染雞群的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明首先將H9N2型禽流感病毒進(jìn)行擴(kuò)增，獲得目的片斷，將該片斷與載體連接，得到重組表達(dá)質(zhì)粒，導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)，獲得一個(gè)融合蛋白；該融合蛋白經(jīng)過(guò)純化，得到H9N2型禽流感病毒NS1蛋白，將該蛋白作為抗原包被酶標(biāo)反應(yīng)板，建立酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法測(cè)定待檢血清中與抗原反應(yīng)的抗體水平，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析確定酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)陰陽(yáng)性判定的臨界值、最少的檢測(cè)樣本數(shù)；最后根據(jù)雞群樣本的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)平均OD值大小，從群體水平鑒別診斷雞群是否被禽流感野毒感染。本發(fā)明方法從總體鑒別診斷，降低了非特異性反應(yīng)，為及時(shí)診斷、預(yù)防禽流感提供科學(xué)依據(jù)。 【專利類型】發(fā)明申請(qǐng) 【申請(qǐng)人】上海交通大學(xué) 【申請(qǐng)人類型】學(xué)校 【申請(qǐng)人地址】200240上海市閔行區(qū)東川路800號(hào) 【申請(qǐng)人地區(qū)】中國(guó) 【申請(qǐng)人城市】上海市 【申請(qǐng)人區(qū)縣】閔行區(qū) 【申請(qǐng)?zhí)枴緾N200610148212.X 【申請(qǐng)日】2006-12-28 【申請(qǐng)年份】2006 【公開(kāi)公告號(hào)】CN1996021A 【公開(kāi)公告日】2007-07-11 【公開(kāi)公告年份】2007 【IPC分類號(hào)】G01N33/569; G01N33/543 【發(fā)明人】孫建和; 王琰; 陸承平; 嚴(yán)亞賢 【主權(quán)項(xiàng)內(nèi)容】1、一種鑒別診斷禽流感感染雞群的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，其特征在于，所述方 法具體步驟包括： ①通過(guò)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增H9N2型禽流感病毒NS1蛋白的基因； ②將步驟①擴(kuò)增所得H9N2型禽流感病毒NS1蛋白的基因通過(guò)酶切插入到載體質(zhì)粒 pET-32a(+)中，構(gòu)建出原核表達(dá)質(zhì)粒，將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中，異 丙基巰基半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn) 鑒定為融合蛋白； ③將步驟②所得融合蛋白作為抗原包被酶標(biāo)反應(yīng)板，建立酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方 法，確定反應(yīng)條件； ④按照步驟③建立的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法，對(duì)禽流感H9N2感染組雞血清、30 日齡非免疫雞的陰性血清、禽流感H9N2滅活疫苗接種組雞血清進(jìn)行檢測(cè)； ⑤按照統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，確定禽流感血清的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)陰 陽(yáng)性判定的臨界值和最少樣本數(shù)； ⑥根據(jù)血清樣本酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)陰陽(yáng)性判定的臨界值和規(guī)定的最少檢測(cè)樣本 數(shù)，按照雞群血清樣本的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)平均吸光度的大小，平均吸光度高于臨界 值的確定為雞群感染了禽流感野毒。 【當(dāng)前權(quán)利人】上海交通大學(xué) 【當(dāng)前專利權(quán)人地址】上海市閔行區(qū)東川路800號(hào) 【統(tǒng)一社會(huì)信用代碼】1210000042500615X0 【被引證次數(shù)】4 【被他引次數(shù)】4.0 【家族被引證次數(shù)】4

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