【摘要】本發(fā)明公布了一種防盜性能更強(qiáng)的鎖，閘兩用自 行車鎖，它是由兩個具有良好機(jī)械強(qiáng)度的并通過同一 條軸可靠連接在一起的鎖梁，一個同心雙圓柱形鐵 鎖，一個機(jī)械強(qiáng)度良好的鎖條和一個彈性良好的鋼絲 構(gòu)成的自行車鎖，也同時是由兩鎖梁、鎖條、鐵鎖、
【摘要】 本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別是克隆有丙酰化酶 基因的螺旋霉素鏈霉菌的構(gòu)建方法。本發(fā)明采用基 因工程方法，其中包括采用質(zhì)粒PIJ702為載體對生米 卡鏈霉菌總DNA進(jìn)行鳥槍克隆，轉(zhuǎn)化至變鉛青鏈霉 菌TK54，挑選轉(zhuǎn)化子和提取重組質(zhì)粒，得到№9轉(zhuǎn)化 子，將自№9轉(zhuǎn)化子提取得到的№9重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至 螺旋霉素鏈霉菌，挑選克隆有№9重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 子，得到克隆有丙酰化酶基因的包括№61在內(nèi)的螺 旋霉素鏈霉菌，將該螺旋霉素鏈霉菌進(jìn)行發(fā)酵即可工 業(yè)生產(chǎn)丙酰螺旋霉素，丙酰螺旋霉素在總產(chǎn)物中含量 在20％以上，菌種遺傳性穩(wěn)定。 【專利類型】發(fā)明申請 【申請人】中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所 【申請人類型】科研單位 【申請人地址】100050北京市崇文區(qū)天壇西里一號 【申請人地區(qū)】中國 【申請人城市】北京市 【申請人區(qū)縣】東城區(qū) 【申請?zhí)枴緾N91100023.2 【申請日】1991-01-09 【申請年份】1991 【公開公告號】CN1052507A 【公開公告日】1991-06-26 【公開公告年份】1991 【授權(quán)公告號】CN1037008C 【授權(quán)公告日】1998-01-14 【授權(quán)公告年份】1998.0 【IPC分類號】C12N15/09; C12N1/21; C12N15/54; C12N15/63 【發(fā)明人】李元; 李煥婁; 石蓮英; 劉伯英; 李曉平 【主權(quán)項內(nèi)容】1、克隆有丙酰化酶基因的螺旋霉素鏈霉菌的構(gòu)建方法，其特征在于： a、鳥槍克?。阂再|(zhì)粒PIJ702為載體將經(jīng)限制性內(nèi)切酶Bg1Ⅱ分別酶切過的米生卡鏈霉菌(Streptomyces mykarofaciens)總DNA和PIJ702質(zhì)粒DNA，以3～5∶1濃度比，在T4-DNA連接酶作用下，于10～14℃放置3小時以上進(jìn)行連接反應(yīng)，得到重組DNA分子。 b、轉(zhuǎn)化：采用a步驟中連接后的重組DNA，以變鉛青鏈霉菌TK54的原生質(zhì)體為受體，按Hopwood等人的方法將連接后的DNA轉(zhuǎn)化進(jìn)入所說的受體菌中； c、挑選轉(zhuǎn)化子及提取重組質(zhì)粒：以含硫鏈絲菌素終濃度為25微克/毫升的R2瓊脂平板挑選含重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子，在所說的含硫鏈絲菌素R2平板上所選的白色菌落即為含重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子，然后采用快速堿變性方法提取含重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化子，將瓊脂糖凝膠電泳后確定為重組質(zhì)粒的樣品再進(jìn)行限制性內(nèi)切酶Bg1Ⅱ的酶切，酶切后的DNA片段與在同一瓊脂糖凝膠電泳平板上泳動的入噬菌體DNA限制性內(nèi)切酶HindⅢ酶切片段泳動距離進(jìn)行比較，從而確定各片段分子量大小，挑選出其中質(zhì)粒分子量為10.0kb，插入片段為4.16kb的NO.9重組質(zhì)粒；從而得到NO.9重組質(zhì)粒DNA； d、NO.9重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：以螺旋霉素鏈霉菌為受體菌，按照Hopwood等人的方法，將該NO.9重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入受體菌內(nèi)，使丙酰化酶基因在其中克隆和表達(dá)；e、挑選克隆有NO.9重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化子。 在含硫鏈絲菌素終濃度為25微克/毫升的R2再生瓊脂平板上進(jìn)行挑選轉(zhuǎn)化子，采用Hopwood等人的方法進(jìn)行原位雜交，以NO.9重組質(zhì)粒為探針，與固定于硝酸纖維素薄膜上經(jīng)過變性處理的轉(zhuǎn)化子DNA進(jìn)行原位雜交，從中挑選出陽性雜交結(jié)果的克隆菌株，因此，獲得克隆有丙?；富虻穆菪顾劓溍咕?【當(dāng)前權(quán)利人】中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所 【當(dāng)前專利權(quán)人地址】北京市崇文區(qū)天壇西里一號 【統(tǒng)一社會信用代碼】12100000400819808G 【被引證次數(shù)】3.0 【被他引次數(shù)】3.0 【家族引證次數(shù)】1.0 【家族被引證次數(shù)】3.0
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